| Summary: | La tristeza de los cítricos es la enfermedad viral más
importante de éstos a nivel mundial; debido a que
en los últimos 20 años ha causado la muerte a más
de 100 millones de árboles en América del Sur,
California, Florida (EE.UU.), Israel y España. El Citrus
tristeza closterovirus (Virus de la tristeza de los cítricos
o VTC) se transmite principalmente por el áfido
Toxoptera citricida y por material vegetativo infectado
(injertos). El áfido T. citricida ha sido recientemente
detectado en el sureste de nuestro país. La
presencia del virus y del áfido en el territorio mexicano
es relevante porque la mayoría de las plantas
comerciales (más del 90%) están injertadas sobre
naranjo agrio que es susceptible al VTC, por lo que
se podría ocasionar una epidemia. La caracterización
molecular de diferentes razas, la cual incluye
la secuenciación completa del genoma del VTC, ha
abierto la puerta para hacer diversos estudios encaminados
a contrarrestar (disminuir) los daños causados
por este complejo viral. Por lo anterior, este
trabajo de investigación tuvo como objetivo desarrollar
un método para diferenciar razas del VTC,
basado en la caracterización molecular del genoma
viral. Para lograrlo se amplificó la secuencia del
gen de la cápside, posteriormente se buscaron
polimorfismos con enzimas de restricción que permitieran
diferenciar razas débiles de severas. Los
resultados mostraron que al realizar los RFLPs empleando
la enzima Hae III se lograron diferenciar
las razas débiles de las severas. De igual forma, el
uso de la enzima Kpn I discriminó las razas que ocasionan
picado de tallo de las que inducen el declinamiento.
Los dendrogramas derivados del alineamiento
múltiple de las secuencias de aminoácidos
mostraron la separación de las razas débiles de las
severas. El análisis de la secuencia nucleotídica del
gen p25 en las posiciones 49, 63 y 124 mostró a
los aminoácidos glicina, treonina y fenilalanina presentes
en las razas severas.
The Citrus Tristeza closterovirus (CTV) is the most
important viral disease of the citrus trees in the world,
infecting more than 100 million trees in the past 20
years in South America, U.S.A, Israel and Spain. The
CTV is transmitted by the aphid Toxoptera citricida
and by infected vegetative material. The most visible
effects caused by the CTV are a fast decline and
death of trees grafted onto rootstocks (Citrus
aurantium L). The presence of the virus and the aphid
in the Mexican territory constitutes a real hazard
considering that most of the commercial plants (>
90%) are grafted on C. aurantium, which is
susceptible to CTV, thus creating the possibility of
an epidemic. The detection of VTC has been mainly
achieved by serology, and lately by molecular
methods. The molecular characterization of different
races, including the complete genome sequence of
the CTV, has allowed progress in obtaining
transgenic citric cultivars resistant to this virus. This
study was aimed at developing a method for the
differentiation of races of the CTV, based on the
molecular characterization of the viral genome. In
doing so, we amplified the coat protein gene.
Afterward, we examined its polymorphisms with
restriction enzymes that allowed differentiation
between weak and severe races. Our results show
that using the enzyme Hae III in PCR products of the
gene p25, it was possible to relate its genetic profiles
to the different CTV races. The use of Hae III allowed
us to distinguish the weak races (CBG-T2, CBG-V2)
from the severe ones (CBG-NL1, CBG-NL2, CBGV1,
H33). Furthermore, the enzyme Kpn I allowed
differentiating between races that cause stem pitting
and those inducing decline. The analysis of the P25
gene sequence in positions 49, 63, and 124
demonstrated the presence of the amino acids
glycine, threonine, and phenylalanine in severe races.
These amino acids could be involved in the
pathogenicity of the CTV.
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