Caracterización biológica de parasporinas en cepas nativas de bacillus thuringiensis - Espino Vázquez, Astrid Nalleli (2014)
Las parasporinas (PS) representan una nueva clase de proteínas de los cristales de Bacillus thuringiensis con actividad biológica hacia células de cáncer de diversos orígenes. Se caracterizan por presentar baja o nula citotoxicidad hacia células normales, además de inducir la apoptosis o necrosis de las células blanco. En este trabajo fueron detectadas siete cepas de B. thuringiensis productoras de PS, por medio de ensayos de in vitro de citotoxicidad y amplificación génica por PCR múltiple. Todas desplegaron actividad preferencial contra las diversas líneas celulares de cáncer y baja citotoxicidad hacia células normales de piel. Como resultado de la caracterización de las proteínas paraesporales, fueron identificadas las siguientes parasporinas: PS1 (cepas CL9-1, CL9-3, IB79), PS2 (IB88, CL9-21), PS3 (CL9-21), PS4 (IB84, IB79, CL9-21). Únicamente no fue posible la caracterización del tipo de PS presente para la cepa GM18, ya que las proteínas de su cristal no mostraron relación con las PS de referencia en ninguna de las técnicas empleadas. Con respecto al modo de acción, la evidencia experimental sobre los cristales de GM18, CL9-1 y CL9-3 apunta a la inducción de apoptosis en las células de leucemia MOLT-4. Mientras que para las cepas restantes, se propone la muerte por necrosis, producida por pérdida de la integridad de membrana. Adicionalmente, por medio de microarreglos de ADN, se llevó a cabo un estudio más detallado del efecto de los cristales de IB84 en células MOLT-4. Mismo que reveló la activación de numerosas rutas implicadas en la respuesta celular a toxinas formadoras de poros (TFP). Entre las principales figuran la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK), señalización por calcio, endocitosis e hipoxia. La validación reiteró la regulación de genes de importancia en dichas rutas que codifican para ciertos receptores y moléculas de membrana, así como algunos ligandos y moléculas de señalización intracelular. En conclusión, los resultados confirman la presencia de diversos tipos de PS en varios de nuestros aislados, que poseen características únicas de gran potencial para su aplicación como nuevos agentes terapéuticos