Aislamiento y caracterización de antígenos de E. histolytica inductores de producción de óxido nítrico en fagocitos humanos - Corral Symes, Ruth (2008)
La amibiasis es una enfermedad producida por el protozoario parásito Entamoeba histolytica. Estudios in vitro han demostrado que la actividad amebicida de macrófagos activados depende principalmente de la síntesis inducible de óxido nítrico (NO). Varios antígenos han sido probados como vacunas en modelos animales. Sin embargo, aún no se ha demostrado que alguno de estos sea capaz de inducir una respuesta inmune protectora en seres humanos. Nosotros propusimos como alternativa aislar y caracterizar antígenos de E. histolytica capaces de activar fagocitos humanos (FgH) con producción de NO y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α). Se determinó la producción de nitritos, en co-cultivos de monocitos y linfocitos humanos provenientes de sangre periférica, en las líneas monocíticas humanas THP1 y U937, y en células totales de sangre periférica estimuladas con lipopolisacáridos (LPS). No se encontraron diferencias significativas en la producción de nitritos entre las células no estimuladas y los grupos experimentales (P > 0.05). Las diferencias significativas se observaron en la línea de macrófagos murinos J774 (P < 0.05). Sin embargo, al estimular células totales de sangre periférica durante 5 h con LPS y determinar la producción total de NO en plasma, mediante la reducción de nitratos a nitritos, se obtuvieron los mejores resultados (P < 0.05). Este modelo se utilizó para evaluar la respuesta de los FgH frente a los antígenos amibianos obtenidos. La producción de NO en FgH estimulados con antígeno total amibiano (ATA) y con fracciones amibianas obtenidas mediante HPLC, fue dosis-dependiente. Las fracciones que indujeron la mayor producción de NO fueron la fracción F6 y F7, produciendo 25 ± 2 y 23.31 ± 2 µM, respectivamente, a una concentración de 500 ng/mL. Por otro lado, las células estimuladas con ATA y con la fracción F7 produjeron 65.2 pg/mL y 9.6 pg/mL de TNF-α, respectivamente. En ambos casos las diferencias fueron significativas con respecto a las células no estimuladas (P < 0.05). Nuestros resultados e investigaciones previas mostraron que existen numerosas limitaciones en modelos diseñados para determinar producción de NO en fagocitos humanos. Las principales son estimulación inadecuada, inhibición transcripcional, enzima sintasa inducible del óxido nítrico (iNOS) no funcional, y falta de sustrato y de cofactores indispensables. Considerando que el TNF-α aumenta la citotoxicidad dependiente de NO de los macrófagos contra E. histolytica, nosotros proponemos que los antígenos aislados en el presente proyecto son excelentes inmunógenos y por tanto, candidatos para desarrollar una vacuna; porque contribuyen al desarrollo de los mecanismos efectores celulares más efectivos en la defensa del hospedero contra este parásito.