Expresión de proteínas de fusión recombinantes con el péptido AL1 de la hormiga Pseudomyrmex triplarinus
Desde épocas precolombinas se conoce que algunas poblaciones indígenas sudamericanas usaban el veneno de la hormiga Pseudomyrmex triplarinus para aminorar los síntomas de la Artritis Reumatoide. La caracterización parcial de los componentes peptídicos de este veneno, mostró que contiene 12 proteínas...
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Tesis |
| Language: | Spanish / Castilian |
| Published: |
2006
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| author | Flores Espínola, Argentina |
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| description | Desde épocas precolombinas se conoce que algunas poblaciones indígenas sudamericanas usaban el veneno de la hormiga Pseudomyrmex triplarinus para aminorar los síntomas de la Artritis Reumatoide. La caracterización parcial de los componentes peptídicos de este veneno, mostró que contiene 12 proteínas siendo los más abundantes 4 péptidos de bajo peso molecular. El uso del veneno completo o de los péptidos de bajo
peso molecular han inducido una mejoría generalizada en pacientes con Artritis Reumatoide y una alta actividad anti-inflamatoria en el modelo animal respectivamente.
En este proyecto nos enfocamos a la expresión de proteínas de fusión con uno de los péptidos de bajo peso molecular (AL1). Para ello se clonó la secuencia nucleotídica codificante a AL1 en los vectores de expresión procarióticos pMAL, pTWIN y pTYB y
las clonas fueron secuenciadas para la confirmación de la secuencia nucleotídica. Posteriormente, los plásmidos recombinantes se transformaron en las cepas de Escherichia coli TB1 y ER2566 y se realizó el análisis de la expresión del péptido AL1 unido a la proteína de unión a maltosa (MBP) y a las Inteinas. Las tres proteínas de fusión fueron analizadas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida SDS-PAGE
al 7.5% y MBP-AL1 fue purificada mediante cromatografía de afinidad usando la resina de amilosa. Finalmente, se realizaron los ensayos de liberación del péptido AL1 mediante el corte para la MBP con la proteasa Xa y para la Inteinas se utilizaron
condiciones reductoras de pH 7 y con DTT a 25oC.
Durante el desarrollo de la tesis se realizó exitosamente la expresión de las proteínas de fusión MBP-AL1, INTEINA1-AL1 e INTEINAC-AL1 en tres sistemas de expresión procarióticos. Además se realizó la purificación de la proteína de fusión MBPAL1 y desafortunadamente el péptido AL1 no se pudo separar en ninguna de las proteínas de fusión. La producción a futuro de este péptido AL1 requiere optimizar las condiciones de liberación, así como determinar el análisis funcional y su potencial actividad anti-inflamatoria lo que ofrece un producto farmacológicamente prometedor en el tratamiento de pacientes con enfermedades inflamatorias y Artritis Reumatoide. |
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