Efecto de la azitromicina en la producción de Biofilm y su composición en aislamiento clínicos de Acinetobacter baumannii - Lara Medrano, Reynaldo (2017)
Materiales y Métodos: Los aislamientos de A. baumannii seleccionados se probarán a través de un método semi-cuantitativo de tinción de cristal violeta y se determinará el índice de biofilm. Los aislamientos se ensayarán de manera cuádruple en 2 experimentos diferentes llevado a cabo en diferentes días. Se inocularán alícuotas de suspensión bacteriana (100 uL) dentro de pocillos individuales e incubados a 37°C por 48 horas. Después de la incubación, las células planctónicas serán transferidas a una nueva placa de microtitulación de fondo plano, y su DO será leída en un lector de placas ELISA a una longitud de onda de 600 nm. Posterior a esto, los biofilms serán lavados 2 veces con 200 uL de solución salina amortiguada con fosfato (pH 7.40). Cuando el biofilm esté seco, se teñirá con 100 uL de cristal violeta 0.1% por 30 minutos a temperatura ambiente. El exceso de cristal violeta será removido con 200 uL de solución salina amortiguada por 5 veces. Finalmente, el biofilm teñido será resuspendido en 200 uL de etanol al 95%, para que la medición sea homogénea. La DO de los pocillos será medida a 595 nm. Para determinar el nivel de producción de biofilm se utilizará la clasificación de Christensen et al, ya que a la fecha no existen métodos para definir la producción de biofilm por A. baumannii. Los aislamientos con DO ≥ 0.25, de 0.15 a 0.24, y ≤ 0.14 serán considerados productores de biofilm fuerte, moderado y débil, respectivamente. El índice de biofilm se definirá con la relación entre células planctónicas y de biofilm (DO células planctónicas/DO células de biofilm). Este mismo ensayo se reproducirá añadiendo las concentraciones seleccionadas de azitromicina al caldo soya tripticaseína con 1% de glucosa. Staphylococcus saprophyticus ATCC 15305 (biofilm positivo) será usada como organismo de control de este ensayo.