Persistencia de marcadores para Bacteroidales como microorganismos indicadores de trazabilidad en tomate y melón contaminados artificialmente - Ordaz Cervera, Gilberto (2017)
Las bacterias indicadoras de contaminación fecal (FIB) no permiten rastrear la fuente de contaminación (MST), por lo que miembros del orden Bacteroidales se han propuesto como indicadores alternativos, dada su abundancia en las heces y especificidad de hospedero; sin embargo, a la fecha, su compartamiento solo se ha evaluado en agua y su persistencia no está bien estudiada. En este trabajo se evaluó la persistencia de los marcadores de Bacteroidales y FIB en tomate y melón contaminados artificialmente y almacenados bajo dos condiciones de temperatura y humedad. Las bacterias utilizadas fueron Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433; Bacteroides thetaiotamicron (de origen humano) y las cepas de Bacteroidales spp. 15PIG y 28COW, de origen porcino y bovino respectivamente. Para determinar la persistencia de los Bacteroidales, heces estériles se inocularon con las cepas bacterianas y se utilizaron para contaminar filtros (superficia lisa), corchos (superficie rugosa), tomates y melones, que se almacenaron bajo condiciones de refrigeración (10ºC/95%HR) y medio ambiente (25ºC/65%HR) hasta por 25 días, monitoreando la persistencia de las FIB por microbiología convencional y marcadores de Bacteroidales por qPCR. Se encontró que en filtros y corchos ambas FIB disminuyeron en concentración durante el estudio, E. coli redujo hasta 3.28 logUFC/ml en refrigeración a los 25 días y en medio ambiente fue indetectable hacia los 10-20 días. Para el caso de E. faecalis a los 25 días se redujo de 0.52 a 2.82 logUFC/ml. Cuando el ensayo se realizó en vegetales, ambas FIB aumentaron su concentración en ambas condiciones de almacenamiento, disminuyendo posteriormente. Para el caso de los marcadores de Bacteroidales todos fueron detectados en las muestras; con valores equivalentes a 1.15-5.68 logUFC. El análisis de ANOVA demostró que la humedad fue el factor que mayor efecto tuvo en la persistencia de las FIB; en tanto que para Bacteroidales no hubo diferencia (P≤0.05) en los valores durante el tratamiento. Con esto se demostró la persistencia de marcadores (general y especie-específicos) de Bacteroidales durante la vida de anaquel de tomates y melones contaminados; por lo que pueden ser empleados como indicadores para determinación de la fuente de contaminación fecal en complementariadad o reemplazo de las FIB. ABSTRACT Fecal Indicator Bacteria (FIB) requires time and selective culture media to grow and do not allow microbial source tracking (MST). Bacteroidales have been proposed as alternative indicators due to their abundance on feces and host specificity, allowing MST. Bacteroidales marker behavior has been mainly evaluated on water and their persistence is not well undestod. Due to this, persistence of hostspecific Bacteroidales markers and FIB on tomatoes and melons artificially contaminated and stored under two different environmental conditions was evaluated. The strains used were Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433; Bacteroides thetaiotamicron (human origin); and Bacteroidales 15PIG and 28COW (pig and cow origin). To determinate Bacteroidales persistence, sterile feces from the different hosts were contaminaed with the strains and applied to filters, flat cork, tomatoes and melons, and stored under refrigeration (10ºC/95%HR) and room conditions (25ºC/65%HR), Persistence was monitoring up to 25 days. FIB were analyzed by selective agar plating and Bacteroidales markers by qPCR. Both FIB showed reductions onto filters and cork surfaces during the study, E. coli reduced up to 3.28 logCFU/ml under refrigeration conditions and not detected between days 10 to 20 at room conditions. E. faecalis showed reductions from 0.52 to 2.82 logCFU/ml in both treatments by day 25. FIB increased numbers in produce in both storage conditions, showing a slight reduction by the end of the study at room conditions. All Bacteroidales markers were detected in all samples at levels 1.15-5.5,569 logCFU/ml. ANOVA analysis showed that persistence of FIB was affectd mainy by humidity. Bacteroidales markers did not show differences between them. Persistence of universal and specie-specyfic Bacteroidales markers were proved during all self life of tomatoes and melons contaminated artificialy. We conclude Bacteroidales markers are able to be used for MST pourpuse, together or instead of FIB.