Evaluacion de la respuesta inmune de macrofagos murinos J774A.1 contra Encephalitozoon cuniculi - González Machorro, Jesús Rubin (2017)
Encephalitozoon cuniculi actúa como parásito intracelular en macrófagos de mamíferos al ser fagocitadas sus esporas. La unión de este patógeno a receptores TLR2 en macrófagos humanos estimula la expresión de IL-12 y TNF-α que activan a linfocitos NK para que produzcan IFN-Ȗ, citocina que confiere a los macrófagos propiedades antimicrosporidianas. Sin embargo, algunos esporoplasmas escapan de lisosomas hacia citoplasma y se desarrollan dentro de una vacuola parasitófora evadiendo así su destrucción. Este estudio evaluó el índice fagocítico de esporas de E. cuniculi y su supervivencia intracelular en macrófagos J774A.1 así como sus efectos sobre la producción de óxido nítrico y viabilidad celular. Se utilizaron tres tipos de esporas: 1) Intactas, 2) Muertas por calor a 90°C, y 3) Muertas por formalina al 10%. La activación de macrófagos incrementó (P≤0.01) la fagocitosis y produjo una disminución (P≤0.01) de esporas intracelulares a las 24 y 48 h, no obstante, a las 72 h los microsporidios aumentaron significativamente (P≤0.001). Se encontraron diferencias significativas (P≤0.05) en la producción de óxido nítrico entre las 3 y 72 h en los tratamientos de activación y de infección. Además, se encontraron diferencias significativas (P≤0.05) en la viabilidad celular entre las 3 y 72 h en el tratamiento de infección. Los resultados aquí mostrados indican que la activación de macrófagos J774A.1 con LPS a 50ng/ml consigue aumentar la fagocitosis, pero sus efectos son limitados y E. cuniculi es capaz de sobrevivir sin inducir un aumento en la producción de óxido nítrico ni comprometer la viabilidad de estos. ABSTRACT Encephalitozoon cuniculi acts as an intracellular parasite in macrophages as their spores are phagocytosed. Binding of this pathogen to TLR2 receptors in human macrophages stimulates the expression of IL-12 and TNF-α that activate NK lymphocytes in order to produce IFN-Ȗ which confers to macrophages antimicrosporidian properties. However, some sporoplasms may escape from lysosomes into cytoplasm and develop into a parasitophorous vacuole evading their destruction. This study evaluated the phagocytic index of E. cuniculi spores and its intracellular survival on J774A.1 as well as its effects on the production of nitric oxide and cellular viability. Three types of spores were used, 1) untreated spores, 2) killed by heating (90°C), and 3) killed with 10% formalin. The activation of macrophages increased (P≤0.01) the phagocytosis and produced a decrease (P≤0.01) of intracellular spores at 24 and 48 h, however at 72 h the microsporidia increased significantly (P≤0.001). Significant differences were found (P≤0.05) in the production of nitric oxide between 3 and 72 h in the treatments of activation and infection. Also, significant differences were found (P≤0.05) in the cell viability between 3 and 72 h in the infection treatment. The results here shown indicate that the activation with LPS at 50ng/ml increases (P≤0.01) phagocytosis, but their effects are limited and E. cuniculi can survive without inducing an increase in the production of nitric oxide neither compromising the macrophage viability.