Los residuos 32 y 36 de la hélice 2 del homeodominio de Antennapedia son necesarios para la interacción con TFIIEβ y para su especificidad funcional en D. melanogaster. - Altamirano Torres, Claudia Dalila (2018)
RESUMEN: Las homeoproteínas constituyen una familia de factores de transcripción con un papel predominante para determinar el plan corporal de un embrión durante el desarrollo. Estas contienen el homeodominio (HD) de unión al DNA que aumenta su especificidad al interactuar con cofactores adicionales constituyendo el interactoma. En Drosophila, la primera liga de interacción funcional con un factor general de transcripción (GTF) se encontró entre Antennapedia (Antp) y BIP2 (complejo TFIID). Las proteínas Hox también interactúan con otros componentes de la maquinaria basal de la RNA Pol II, como la subunidad Med19 del complejo Mediador (MED), TFIIEβ y el factor de pausa de la transcripción M1BP. Todas estas interacciones muestran claramente que en la regulación transcripcional dirigida por Hox están implicadas diversas proteínas, sin embargo, el mecanismo molecular preciso no es del todo claro. En esta tesis, nos centramos en la interfase proteína-proteína de Antp-TFIIEβ para determinar los contactos específicos de interacción, así como su importancia funcional in vivo. La estrategia experimental consistió en analizar la interacción de las proteínas mediante el uso de Fluorescencia por Complementación Bimolecular (BiFC) in vivo en embriones y discos imaginales de Drosophila. Los resultados mostraron muy evidentemente que TFIIEβ interactúa con Antp a través de la hélice 2 del HD, específicamente las posiciones de aminoácidos I32 y H36 de Antp. Para determinar que estas dos posiciones en la hélice 2 son cruciales para la función homeótica de Antp en la involución de la cabeza y las transformaciones torácica y antena-tarso, se realizaron ensayos de expresión ectópica. De manera interesante, la sobreexpresión de Antp y TFIIEβ en el disco imaginal de antena mostró que esta interacción es indispensable para la transformación antena-tarso. También se determinó, mediante BiFC competitivo que los GTFs: TBP, Bip2, TFIIB y TFIIAγ, y las homeoproteínas EXD y AbdB afectaron la interacción dimérica Antp-TFIIEβ sugiriendo la formación probable de complejos triméricos. Nuestros resultados muestran claramente que los aminoácidos 32 y 36 en la hélice 2 de Antp HD son necesarios para la interacción con TFIIEβ y para la especificidad funcional de Antp, lo que abre la posibilidad para analizar su función en el control transcripcional de activación y/o represión de genes blanco en el interactoma Hox durante el desarrollo de Drosophila.