Adenocarcinoma colorrectal: análisis de correlación entre la concentración de células madre de tumor ABCB1+/BNIP3+/KRT18+, fármacorresistencia y respuesta clínica a FOLFOX-6. - Solis Coronado, Orlando Daniel (2019)
Antecedentes. El adenocarcinoma colorrectal (ACCR) es un problema mundial de salud pública, debido a su alta prevalencia y mortalidad. El tratamiento del ACCR es la cirugía, y en etapas avanzadas, ésta se combina con quimioterapia. Uno de los esquemas más frecuentemente utilizados es FOLFOX-6; que incluye 5-fluorouracilo, oxaliplatino y leucovorina (5FUOL). A pesar de que FOLFOX-6 es uno de los mejores esquemas, disponibles actualmente, más del 90% de los pacientes tratados con éste y otros esquemas desarrollan fármacorresistencia, y debido a ello, la mayoría de ellos mueren en un término promedio de 20 meses. Se ha señalado a las células madre de tumor (CMT) como las principales responsables de la iniciación de cáncer, de la invasión de tejidos y metástasis, de su fármacorresistencia, y de su recurrencia. Las CMT tienen marcadores típicos para su identificación; p.e. CD44 y CD24. Sin embargo, estos marcadores no son específicos de CMT. Respecto al surgimiento de fármacorresistencia, nuestro grupo de trabajo, previamente identificó la sobreexpresión de los genes KTR18, ABCB1 y BNIP3 en aislados de CMT resistentes a 5FUOL. El problema. Los tratamientos convencionales son iatrogénicos y los pacientes mueren en un plazo relativamente corto porque surgen CMT resistentes a los fármacos empleados. Por ello se requiere desarrollar métodos, que permitan predecir si un tratamiento estandarizado será útil para al menos prolongar la vida de los pacientes. En caso contrario, permitir la prescripción de un tratamiento más eficaz. Sin embargo, es realmente difícil, laborioso, tardado y costoso aislar CMT y caracterizar su exoma. Justificación. Este estudio permitirá analizar cortes histológicos mediante inmunohistoquímica, simplificando considerablemente la detección de CMT resistentes a 5FUOL. Objetivo. Investigar si, en cortes histológicos de ACCR existe correlación entre la cantidad de CMT ABCB1+, CK-18+, BNIP3+, con las siguientes variables: resistencia in vitro a 5FUOL, presencia de metástasis, índice de Karnofsky y porcentaje de pacientes sobrevivientes a dos años de haberse iniciado el tratamiento. Material, métodos y resultados. De seis ACCRs frescos, mediante cultivo en un medio selectivo para CMT y en placas de baja adherencia, aislamos, expandimos y caracterizamos células resistentes a 5FUOL. Con inmunofluorescencia de doble marcaje y utilizando anticuerpos monoclonales, verificamos que los aislados de ACCR coexpresaban los marcadores de CMT (CD24 y CD44) y de resistencia a 5FUOL (ABCB1, CK-18+ y BNIP3). Además, indujimos a los aislados de CMT a diferenciarse a células epiteliales y verificamos su estirpe epitelial, porque estas células expresaban los marcadores de epitelio CK-17, CK-20, una mezcla de citoqueratinas (Cocktail-CK) y EGFR. Por lo tanto, demostramos que las CMT de ACCR expresaban los marcadores de resistencia y que éstas podían identificarse en cortes de ACCR, utilizando estos marcadores. De la base de datos de nuestro laboratorio seleccionamos 20 casos de ACCR, registramos los datos sociodemográficos y clínicos y recuperamos las muestras de tumor correspondientes — criopreservadas o incluidas en parafina —, de las cuales obtuvimos cortes finos para determinar el área ocupada por las CMT que coexpresaban los marcadores de CMT resistentes a 5FUOL, previamente validados en los aislados de CMT, arriba mencionados. Cuantificamos en cada corte, el área ocupada por las células coexpresando los marcadores de interés. Para ello utilizamos un programa de cómputo que dividió en cuadrados el área completa, ocupada por cada corte y dos observadores contaron, independientemente, los cuadros positivos para cada marcador o mezcla de marcadores. El número de cuadros se correlacionó o asoció con las variables arriba mencionadas, utilizando pruebas estadísticas apropiadas. La cantidad de CMT coexpresando CD24/CD26, ABCB1/CK18 y ABCB1/BNIP3 o sólo ABCB1 en cortes de ACCR resistentes a 5FUOL, mostró una correlación y dependencia positivas (p<0.05) con todas las variables arriba mencionadas. Conclusión. Nuestros resultados apoyan nuestra hipótesis. Por lo tanto, la cuantificación de CMT ABCB1+/BNIP3+/KRT18+, en cortes histológicos de ACCR permite saber si FOLFOX-6 será eficaz para tratar a los pacientes con ACCRs desde antes de instituir este tratamiento. El enfoque aquí presentado puede extenderse a otros tipos de cáncer con resultados promisorios.