Análisis de factores de virulencia en aislamientos de Clostridium difficile de dos hospitales de tercer nivel de México. - Martínez Meléndez, Julio Adrián (2018)
Clostridium difficile es una bacteria Gram positiva, anaerobia estricta y productora de esporas y es la causa infecciosa más común de diarrea asociada a la atención de la salud. La infección por C. difficile (ICD) se asocia al uso de terapia antimicrobiana ya que alteran la microbiota intestinal y C. difficile puede colonizar el intestino si la microbiota normal intestinal esta disminuida o ausente. El objetivo de este trabajo fue analizar factores de virulencia que contribuyen a la patogénesis, tales como producción de toxinas, formación de biopelícula y expresión de proteínas involucradas en la adhesión en aislamientos clínicos de C. difficile. Se aisló C. difficile a partir de pacientes con ICD y detectaron los genes de las toxinas A, B y toxina binaria por medio de PCR; además, se determinaron los ribotipos por PCR y electroforesis convencional y capilar. Se evaluó la susceptibilidad a antimicrobianos por dilución en agar. Se determinó la producción de biopelícula mediante tinción con cristal violeta y se determinó su composición mediante ensayos de desprendimiento con proteinasa K, NaIO4 y DNAsa I. Finalmente, se evaluó la expresión de cwp84 y slpA mediante PCR en tiempo real. Se recuperaron 132 aislamientos a partir de 332 muestras (39.8 %); todos los aislamientos fueron tcdA+ y tcdB+; además 89 (67.4%) presentaron la deleción de 18 pb en tcdC. La ribotipificación clasificó a 81 (61.4%) aislamientos como ribotipo 027 y a 18 (13.6%) aislamientos como ribotipo 001. Se encontró susceptibilidad reducida (SR) a ciprofloxacino, moxifloxacino, eritromicina, clindamicina y rifampicina en más del 70% de los aislamientos; no hubo SR a fidaxomicina o tetraciclina; sin embargo hubo SR a vancomicina (31%) y metronidazol (17.4%). Más del 70% (98/132) fueron productores fuertes de biopelícula. Los ensayos mostraron el mayor desprendimiento de la biopelicula con el tratamiento de proteinasa K (>90%). En los aislamientos de ribotipo 001 se encontró sobrexpresión de cwp84 en 40% de ellos y slpA fue sobreexpresado en el 100%; en el ribotipo 027 hubo sobrexpresión de cwp84 en un aislamiento solamente; mientras que slpA fue sobreexpresado en 5/13 (38.5%) aislamientos. Los ribotipos más frecuentes en México son el 027 y 001 y son poseen farmacorresistencia, además de producir biopelícula; las proteínas contribuyen principalmente a la formación de la matriz de la biopelícula. SlpA se sobre expresa en las cepas ribotipo 001.