Disección molecular de la interacción de los HDs de Antennapedia y Ultrabithorax. - Villarreal Puente, Alely Cecilia (2018)
Las homeoproteínas brindan la identidad a los segmentos a lo largo del eje antero-posterior en el desarrollo de Drosophila melanogaster. Estas contienen el homeodominio (HD) altamente conservado que además de sus funciones de reconocimiento del ADN presenta interacciones proteína-proteína, con homeoproteínas y/o factores transcripcionales para llevar a cabo la especificidad funcional. Diversas interacciones proteína-proteína entre homeoproteínas están mediadas por el HD y otras regiones de las homeoproteínas. En esta tesis nos enfocamos en la importancia de Antp y Ubx en la especificación de la región torácica del embrión de Drosophila y los experimentos realizados a la fecha muestran que la interacción Ubx-Antp in vivo en D. melanogaster es a través de los HDs de ambas proteínas. Debido a la evidencia de la interacción de la hélice I en diferentes HDs, se realizó la disección molecular de la interacción Antp-Ubx para determinar si el aminoácido glutámico no. 19 de la hélice I del HD participa en esta interacción mediante mutagénesis sitio-dirigida y Complementación Bimolecular Fluorescente (BiFC) en cultivo celular. Además, se analizó el efecto funcional de la interacción de los HDs en la transformación antenatarso mediante cruzas genéticas y también se determinaron en Antp-Ubx las posibles interacciones triméricas de los factores transcripcionales TBP, TFIIE, TFIIB, TFIIA, EXD y BIP2 mediante BiFC competitivo. Los resultados obtenidos confirman la interacción molecular Antp-Ubx a través de sus HDs ya que presenta un incremento en la interacción del 89% al 96% comparada con la homeoproteínas completas. En esta interacción específicamente la posición aminoacídica no. 19 de la hélice uno del HD de Antp es importante en la interacción mientras que la posición G19 de Ubx no afectó la interacción. Además, la interacción AntpHD-UbxHD afectó la transformación homeótica antena-tarso obteniéndose una transformación parcial y se detectó a los factores de transcripción BIPβ, TBP, TFIIA