Desarrollo de un ensayo enzimático para la detección de iones metálicos utilizando la enzima papaína inmovilizada en nanofibras poliméricas electrohiladas. - Alonso Gutiérrez, Brenda Janett (2016)
En este trabajo, la enzima papaína inmovilizada se utiliza como ensayo para detectar la presencia de iones de metales. Enzima papaína (E.C. 3.4.22.2, 1.6 U/mg) fue inmovilizada en poli (alcohol vinílico) (PVA) sintetizadas bajo la técnica de electrohilado. La distribución del diámetro de las fibras se encontró en el rango de 80 a 170 nm, fue caracterizada con apoyo microscopio electrónico de barrido (SEM). La presencia de la enzima dentro de las nanofibras de PVA se confirmó por espectroscopia infrarroja (FTIR), Calorimetría de barrido diferencial (DSC). La inmovilización de la papaína en la membrana de nanofibras se logró mediante la Reticulación (crosslinking) con un tratamiento de vapor de glutaraldehído (GAvt). La actividad enzimática se realizó de acuerdo a la metodología utilizada por Earlanger et al. método adaptado a la papaína. El sitio activo de la papaína es afectado por la presencia de iones metálicos en el medio de reacción, el ensayo desarrollado es sensible a varios iones de los metales. Se utilizaron: cloruro de mercurio (I) (Hg2Cl2), nitrato de plata (AgNO3), nitrato de cobalto (II) (CoN2O6 6H2O), cloruro cúprico (CuCl2) ,cloruro de zinc (ZnCl2) en concentraciones de 2.5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, 30 ppm and 40 ppm. El ensayo de la papaína comprobó ser tolerante a los xenobióticos, temperatura estable, y tiene un tiempo de ensayo relativamente rápido. La actividad catalítica de la enzima papaína inmovilizada se analizó en presencia de xenobióticos y los iones de los metales a través de UV-visible.