Cover Image

Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.

Show other versions (1)

Propósito y Método del Estudio: Los dominios Per-ARNT-Sim (PAS) son módulos sensoriales y de interacción versátiles en la transducción de señales que les permiten a los organismos adaptarse a cambios en su ambiente externo. Nuestra hipótesis es que el dominio PAS de RsbP de Bacillus subtilis forma e...

Full description

Bibliographic Details
Main Author: Barahona Munguía, Claudia Jeannette
Format: Tesis
Language:Spanish / Castilian
Published: 2016
Subjects:
QR Microbiología
Online Access:http://eprints.uanl.mx/14013/1/1080237764.pdf
_version_ 1824348323002187776
author Barahona Munguía, Claudia Jeannette
author_facet Barahona Munguía, Claudia Jeannette
author_sort Barahona Munguía, Claudia Jeannette
collection Tesis
description Propósito y Método del Estudio: Los dominios Per-ARNT-Sim (PAS) son módulos sensoriales y de interacción versátiles en la transducción de señales que les permiten a los organismos adaptarse a cambios en su ambiente externo. Nuestra hipótesis es que el dominio PAS de RsbP de Bacillus subtilis forma estructuras cuaternarias definidas con el dominio de respuesta diguanilato ciclasa, en presencia de un bucle enrollado o de un dominio PAS alternativo. Nuestro objetivo es determinar la estructura cuaternaria por medio de cromatografía de filtración en gel de proteínas quiméricas que contengan diferentes combinaciones de RsbP-PAS, diguanilato ciclasa y diferentes estructuras de unión entre ambos dominios. Contribuciones y Conclusiones: En el presente estudio se logró el diseño, expresión y purificación de tres proteínas quiméricas con diferente combinación del dominio sensorial PAS de RsbP de B. subtilis (RsbP-PAS) y el dominio de respuesta diguanilato ciclasa, también se modificó el tipo de unión entre los dominios: bucle enrollado por un dominio PAS completo y distinto a RsbP-PAS, verificando así la contribución del bucle o del dominio PAS a la estructura cuaternaria. Las proteínas quiméricas fueron clonadas y expresadas en el vector pGEX-4T-2 que contiene la secuencia que codifica para la proteína de fusión glutatión S-transferasa (GST), esto facilitó las etapas de purificación mediante cromatografía por afinidad y finalmente se determinó su estructura cuaternaria por medio de cromatografía de exclusión por tamaño. Los resultados obtenidos indican que la quimera 1: RsbP-PAS asociado a un dominio PAS alternativo, mostro una proteína de entre 31-34 kDa, consistente con monómero. La quimera 2: RsbP-PAS, el bucle enrollado de Bacillus subtilis y el dominio de respuesta GGDEF, mostró una proteína de entre 74-76 kDa lo que indica la formación de un dímero. La quimera 3: RsbP-PAS, un dominio PAS alternativo, el bucle enrollado de Bacillus subtilis y el dominio GGDEF, muestra una proteína de entre 46-47 kDa consistente con la formación de un monómero. Los resultados obtenidos nos muestran como los dominios PAS pueden presentar diferentes estructuras cuaternarias como lo establecimos en nuestra hipótesis, estos cambios en las proteínas oligoméricas originados en un dominio PAS se pueden propagar a través de la interface entre el dominio PAS y el dominio de respuesta permitiendo la interacción entre los dominios.
first_indexed 2025-02-06T03:09:14Z
format Tesis
id eptesis-14013
institution UANL
language Spanish / Castilian
last_indexed 2025-02-06T03:09:14Z
publishDate 2016
record_format eprints
spelling eptesis-140132022-05-17T15:16:46Z http://eprints.uanl.mx/14013/ Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa. Barahona Munguía, Claudia Jeannette QR Microbiología Propósito y Método del Estudio: Los dominios Per-ARNT-Sim (PAS) son módulos sensoriales y de interacción versátiles en la transducción de señales que les permiten a los organismos adaptarse a cambios en su ambiente externo. Nuestra hipótesis es que el dominio PAS de RsbP de Bacillus subtilis forma estructuras cuaternarias definidas con el dominio de respuesta diguanilato ciclasa, en presencia de un bucle enrollado o de un dominio PAS alternativo. Nuestro objetivo es determinar la estructura cuaternaria por medio de cromatografía de filtración en gel de proteínas quiméricas que contengan diferentes combinaciones de RsbP-PAS, diguanilato ciclasa y diferentes estructuras de unión entre ambos dominios. Contribuciones y Conclusiones: En el presente estudio se logró el diseño, expresión y purificación de tres proteínas quiméricas con diferente combinación del dominio sensorial PAS de RsbP de B. subtilis (RsbP-PAS) y el dominio de respuesta diguanilato ciclasa, también se modificó el tipo de unión entre los dominios: bucle enrollado por un dominio PAS completo y distinto a RsbP-PAS, verificando así la contribución del bucle o del dominio PAS a la estructura cuaternaria. Las proteínas quiméricas fueron clonadas y expresadas en el vector pGEX-4T-2 que contiene la secuencia que codifica para la proteína de fusión glutatión S-transferasa (GST), esto facilitó las etapas de purificación mediante cromatografía por afinidad y finalmente se determinó su estructura cuaternaria por medio de cromatografía de exclusión por tamaño. Los resultados obtenidos indican que la quimera 1: RsbP-PAS asociado a un dominio PAS alternativo, mostro una proteína de entre 31-34 kDa, consistente con monómero. La quimera 2: RsbP-PAS, el bucle enrollado de Bacillus subtilis y el dominio de respuesta GGDEF, mostró una proteína de entre 74-76 kDa lo que indica la formación de un dímero. La quimera 3: RsbP-PAS, un dominio PAS alternativo, el bucle enrollado de Bacillus subtilis y el dominio GGDEF, muestra una proteína de entre 46-47 kDa consistente con la formación de un monómero. Los resultados obtenidos nos muestran como los dominios PAS pueden presentar diferentes estructuras cuaternarias como lo establecimos en nuestra hipótesis, estos cambios en las proteínas oligoméricas originados en un dominio PAS se pueden propagar a través de la interface entre el dominio PAS y el dominio de respuesta permitiendo la interacción entre los dominios. 2016 Tesis NonPeerReviewed text es cc_by_nc_nd http://eprints.uanl.mx/14013/1/1080237764.pdf http://eprints.uanl.mx/14013/1.haspreviewThumbnailVersion/1080237764.pdf Barahona Munguía, Claudia Jeannette (2016) Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.
spellingShingle QR Microbiología
Barahona Munguía, Claudia Jeannette
Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
thumbnail https://rediab.uanl.mx/themes/sandal5/images/tesis.png
title Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
title_full Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
title_fullStr Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
title_full_unstemmed Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
title_short Expresión, purificación y caracterización de proteínas quiméricas de la proteína sensorial RsbP de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa.
title_sort expresion purificacion y caracterizacion de proteinas quimericas de la proteina sensorial rsbp de bacillus subtilis y la enzima diguanilato ciclasa
topic QR Microbiología
url http://eprints.uanl.mx/14013/1/1080237764.pdf
work_keys_str_mv AT barahonamunguiaclaudiajeannette expresionpurificacionycaracterizaciondeproteinasquimericasdelaproteinasensorialrsbpdebacillussubtilisylaenzimadiguanilatociclasa

Similar Items