Caracterización molecular y fenotípica de aislamientos clínicos y ambientales del complejo pseudallescheria boydii - Elizondo Zertuche, Mariana (2014)
Propósito y Método de estudio:A nivel mundial la scedosporiosis es una micosis emergente con un amplio espectro de manifestaciones clínicas y de difícil tratamiento, cuya incidencia es cada vez mayor en pacientes inmunocomprometidos. Recientemente con base en hallazgos moleculares, se demostró que P. boydii es un complejo, por lo que es importante llegar a una identificación precisa de sus especies. El objetivo principal de este trabajo fue aislar y caracterizar muestras clínicas y ambientales del complejo Pseudallescheria boydii por medio de estudios fenotípicos y moleculares. Se recolectaron 101 muestras ambientales de suelo de distintas áreas y regiones geográficas de México, además se recolectaron los datos clínicos y epidemiológicos de 17 muestras de pacientes con diagnóstico mediante cultivo de scedosporiosis las cuales fueron recolectadas en un período de 13 años (2000 - 2013) en el Centro Regional de Enfermedades infecciosas (CREI) del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina, UANL., del estado de Nuevo León. A todos los aislamientos clínicos y ambientales se les realizó identificación microbiológica mediante la observación macroscópica y microscópica, pruebas fisiológicas, enzimáticas y la identificación molecular para obtener la identificación definitiva mediante secuenciación de una región parcial del ITS del ADNr. Posteriormente se llevó a cabo la determinación del pH y nitrógeno total de las muestras de suelo positivas. Se llevó a cabo el estudio de susceptibilidad in vitro a diferentes antifúngicos. Por otro lado, partiendo de la identificación molecular se realizó el estudio de carga fúngica e histopatología en un modelo murino de scedosporiosis sistémica. Por último se siguió con el análisis estadístico para establecer posibles correlaciones entre los hallazgos fenotípicos y genotípicos con las características ambientales, geográficas y epidemiológicas de las especies obtenidas Conclusiones y contribuciones: Se llevó a cabo un estudio filogenético basado en el análisis de una región parcial del ITS del ADNr, lo que corroboró que el complejo de Scedosporium está compuesto por una variedad de especies crípticas.La secuenciación de la región parcial del gen del ITS del ADNr aportó información filogenética para la identificación de las especies del complejo, sin embargo; es necesaria la secuenciación de otros genes conservados como β-tubulina, región D1 y D2 del ADNr, calmodulina, etc., para corroborar esta identificación. Se logró el aislamiento de 7 especies del complejo Scedosporium (S. boydii, S. apiospermum, S. aurantiacum y S. dehoogii, P. angusta, P. fusoidea y P. ellipsoidea), así como también cepas de L. prolificans a partir de aislamientos clínicos.Se logró el aislamientos de las especies del complejo a partir de distintos orígenes y áreas geográficas del país, destacando a Scedosporium apiospermum como la especie más ampliamente distribuida en México. El sitio donde se obtuvieron el mayor número de aislamientos fue de jardín urbano y parques industriales. Mediante las determinaciones fisiológicas no fue posible llegar a una identificación precisa de las especies del complejo.Se demostró que todas las especies del complejo obtenidas son muy resistentes in vitro a los antifúngicos convencionales. Los aislamientos de L. prolificans fueron lo que mostraron mayor resistencia a todos los antifúngicos probados.S. apiospermum, S. aurantiacum y L. prolificans fueron las especies más virulentasen un modelo murino de infección sistémica sin inmunosupresión.