Desarrollo y uso de un sistema serológico para la detección del virus de la tristeza en el análisis masivo de muestras de cítricos - Iracheta Cárdenas, María Magdalena; Rocha Peña, Mario Alberto (2010)
En el presente trabajo se reporta el desarrollo y uso de un sistema serológico para la detección del virus tristeza de los cítricos (Citrus tristeza virus = CTV), en el análisis masivo de muestras de cítricos, con base en la técnica ELISA, en la modalidad de doble sándwich indirecto (DASI), empleando anticuerpos desarrollados contra la proteína recombinante (prb) del gen p25 de la cubierta proteica del virus. El trabajo consistió en la evaluación de anticuerpos específicos prb anti-CTV desarrollados en cabras y conejos, a manera de un kit completo ELISA-DASI. La evaluación se llevó a cabo con tejido proveniente de plantas sanas de cítricos e infectadas por el CTV. La combinación de los anticuerpos prb de cabra T1 empleados como anticuerpos primarios (atrapantes de antígeno) para el tapizado de las placas y de conejo C3 empleados como anticuerpos intermedios (detección del antígeno), fueron eficientes para la detección del CTV presente en muestras de cítricos de una colección internacional de aislamientos del CTV de orígenes geográficos diversos, y se demostró con ello la capacidad de reconocer aislamientos del CTV que causan un amplio espectro de síntomas en diferentes hospedantes cítricos. Asimismo, la combinación de anticuerpos prb cabra T1/conejo C3 fue igualmente eficiente en la discriminación de plantas sanas y plantas infectadas por el CTV que los anticuerpos empleados por la Agencia de Erradicación de Tristeza de California (Central California Tristeza Eradication Agency = CCTEA) empleados en el análisis masivo de muestras de cítricos, así como con un kit comercial disponible para la detección del CTV. Adicionalmente, se demostró la eficiencia de la combinación de los anticuerpos prb T1/C3 para el análisis masivo de muestras de cítricos colectadas dentro del programa regular anual de monitoreo del CTV llevado a cabo por la CCTEA. La evaluación incluyó el análisis de 41,195 muestras provenientes de 301 plantaciones comerciales de los distritos 1, 2 y 3 de California. Mediante el empleo de los anticuerpos prb T1/C3, se encontraron y eliminaron 26 árboles (0.063 %) infectados por el CTV. Los resultados obtenidos en el presente trabajo demuestran que los anticuerpos desarrollados contra la prb del CTV se pueden utilizar como anticuerpos primarios e intermedios para, respectivamente, capturar y detectar antígenos del CTV en ensayos de ELISA, en la modalidad de doble sándwich indirecto.