Análisis de la localización de los filamentos MreB y la formación de flagelos en Escherichia coli, en presencia de carvacrol - Tamez Hernández, Alondra Miroslava (2020)
Escherichia coli es una bacteria considerada como microbiota normal en el intestino humano; sin embargo, algunas cepas son causantes de aproximadamente 630 millones de casos de diarrea en el mundo y entre 5 a 6 millones de muertes al año. Esto es debido a la existencia de seis grupos patogénicos de la especie (conocidos como patotipos) que pueden provocar diversos tipos de enfermedades en el tracto intestinal. El carvacrol es un compuesto afecta la integridad de la membrana bacteriana al alterar su potencial y permeabilidad. Esta estructura se encuentra divida en microdominios funcionales de membrana, caracterizados por la presencia de la proteína MreB la cual crea regiones con fluidez incrementada (RIFs), que están involucradas en la distribución de lípidos y proteínas integrales de membrana. Una de estas proteínas integrales es el flagelo bacteriano, componente clave en algunos tipos de movilidad como la de tipo swarming, la cual permite la colonización y persistencia en diferentes ambientes. El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de mutantes con proteínas de fusión fluorescentes para los genes mreB y fliC de E. coli, a fin de analizar alteraciones en la membrana y el flagelo al estar en contacto con carvacrol. Se diseñaron secuencias de DNA de doble cadena (gblocks) que se integraron en el genoma de E. coli MG1655 mediante recombinación homóloga, generando una doble mutante con las proteínas de fusión (MreB-sfGFP, Flagelina-BFP). Se evaluó la concentración mínima bactericida de carvacrol para la mutante encontrándose diferentes significativas (P < 0.05) entre la cepa silvestre contra la doble mutante, obteniéndose una CMB más elevada para esta última (0.43 ± 0.03 mg/ml). Asimismo, se evaluó la funcionalidad del flagelo mediante ensayo de swarming, encontrándose que las concentraciones subinhibitorias de carvacrol promovieron el movimiento tipo swarming tanto en la cepa silvestre como la mutante. Mediante el presente trabajo se generó de manera correcta una doble mutante con proteínas de fusión, para su observación por microscopía fluorescente; la cual fue funcional y presentó un comportamiento similar a la silvestre, pudiendo así ser de utilidad en ensayos futuros.