Efecto del IMMUNEPOTENT-CRP sobre células NK - Martínez Loria, Alan Benancio (2020)
El IMMUNEPOTENT-CRP® (I-CRP) es un extracto dializable de leucocitos que se obtiene del bazo bovino, posee moléculas menores a 12 kDa y es empleado como adyuvante en pacientes de cáncer en terapias tradicionales, donde aumenta los porcentajes de leucocitos totales y las subpoblaciones CD4+ , CD8+ , CD16+ y CD56+ . Sin embargo, no se ha determinado si el I-CRP induce la activación o incrementa la actividad de las células del sistema inmune, principalmente aquellas poblaciones que expresan CD56 y CD16, las células Natural Killer (NK). Por lo que el objetivo de esta tesis fue establecer si el I-CRP activa a las células NK provenientes de donantes sanos (sin signos clínicos de enfermedad), analizar su capacidad efectora y la modulación del repertorio de NK. Para ello se obtuvieron PBMC y se expusieron al I-CRP (0.3, 0.7 y 1.5 U/mL) durante 24 y 48 h para medir la viabilidad con Calceína-AM. Después se determinó la activación inducida por el I-CRP (1.5 U/mL) midiendo la expresión del marcador CD69, tanto en las PBMC como en las células NK aisladas, comparando contra controles positivos: ConA (1 mg/mL), IL-2 (100 U/mL) e IL15 (15 ng/mL). Después se evaluó la actividad efectora de las células NK estimuladas con el I-CRP, evaluando la desgranulación (CD107a+) antes y después de los co-cultivos contra la línea celular K562. Posteriormente, se realizó un análisis multicitométrico de los marcadores de células NK en células estimuladas con I-CRP. Se observó que el I-CRP no reduce la viabilidad (Calceína+) de las PBMC, comparado al control sin tratamiento, pero sí induce la activación de las células NK (CD69+). Se determinó un aumento significativo en la desgranulación después del tratamiento con I-CRP, que se incrementa después del co-cultivo con células K562.Y el análisis de marcadores indicó que el I-CRP aumenta de manera significativa la expresión de los principales receptores activadores, como NKp46, NKp44, NKp30, NKG2D y NKG2C, observándose también un incremento en el receptor CD85j y en los receptores KIR (Killer Immunoglobulin-like Receptor), pero sin encontrar diferencias significativas en los receptores CD160 y CD226. No se han encontrado reportes que indiquen una modulación similar de estos receptores por parte de otro estimulante. En conclusión, el I-CRP activa a las células NK, mejora su respuesta efectora y aumenta la expresión de los receptores de células NK. Este trabajo ayuda a comprender el mecanismo del I-CRP como inmunoestimulante, contribuyendo a su futuro empleo contra infecciones virales, bacterianas y cáncer, donde el agotamiento de las células NK juega un rol en la progresión de estas.