Inhibición de la replicación y expresión de un replicón subgenómico del virus de la hepatitis c, con RNA’S de interferencia - Elizondo González, Regina (2008)
La infección con el virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud pública a nivel mundial y es considerada como una de las principales causas de hepatitis crónica, cirrosis y carcinoma hepatocelular. En México; aproximadamente el 1.2 % de la población se encuentra infectada con el VHC. Actualmente, la única terapia disponible es el tratamiento combinado de Interferón alfa pegilado y ribavirina; sin embargo, solo un 50-55% de los pacientes logra una respuesta sostenida al final del tratamiento. La terapia génica constituye una alternativa prometedora en el tratamiento contra VHC; y existen diversos estudios en los que se ha logrado un bloqueo exitoso de la expresión y replicación del virus. El empleo del RNA de interferencia (RNAi) como terapia contra el VHC ha sido de gran interés debido a su gran potencial terapéutico y alta especificidad. En este trabajo se estableció como principal objetivo inhibir la expresión y replicación del RNA del Virus de la Hepatitis C en un modelo “in vitro”, a través del bloqueo selectivo de una secuencia conservada del gen NS5b, mediante la tecnología de RNA de interferencia. Se utilizó la línea celular de hepatocitos Huh-7-VHC (línea celular que expresa establemente un replicón subgenómico del VHC), la cual fue transfectada con 3 siRNAs seleccionados contra diversas regiones del gen viral NS5b de manera individual y combinada y se analizó la inhibición de la expresión de la polimerasa viral y la replicación del genoma del VHC. Las células tratadas con el siRNA “A” mostraron una mayor inhibición en los niveles de RNA viral a los 6 días post-transfección, con inhibiciones de 86 y 88% con 100 y 200 nM. En cuanto al siRNA “B”, no se observan cambios significativos en los niveles de RNA viral a los 2 días pos-transfección, mientras que a los 4 y 6 días postransfección se obtuvo un aumento significativo en el RNA viral con respecto al control. Con el siRNA “C” se observó inhibición significativa a los 2 y 4 días post-transfección de alrededor del 57%, sin embargo dicha reducción no se observa a los 6 días post-transfección. Al realizar las combinaciones de estos siRNAs no se observó una ventaja al utilizarlos de manera combinada, obteniéndose una menor inhibición viral al utilizar el siRNA “A” de manera individual. En base a los resultados obtenidos concluimos que el siRNA “A” fue el que presentó la mejor inhibición del VHC de los 3 siRNAs evaluados, y al compararlo en forma individual y combinada nos aporta datos útiles en la compresión del mecanismo del RNA de interferencia.