Interacción del complejo WT1-Par4 con el promotor P1 DE Bcl-2 en la línea celular MCF7 en presencia y ausencia de estímulo estrogénico
Receptor de estrógeno (RE), Bcl-2 y WT1 son proteínas que se encuentran involucradas en el desarrollo del cáncer de mama. Par4 es una proteína pro-apoptótica, cuya interacción con WT1 ha mostrado ser un factor importante en la regulación de sus genes blanco. En este trabajo nos propusimos determina...
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Tesis |
| Language: | Spanish / Castilian |
| Published: |
2006
|
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| author | Hernández Herrera, Anadulce |
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| collection | Repositorio Institucional |
| description | Receptor de estrógeno (RE), Bcl-2 y WT1 son proteínas que se encuentran involucradas en el desarrollo del cáncer de mama. Par4 es una proteína pro-apoptótica, cuya interacción con WT1 ha mostrado ser un factor importante en la regulación de sus
genes blanco. En este trabajo nos propusimos determinar la existencia del complejo WT1-Par4, y su capacidad para unirse al promotor de Bcl-2, así como su relación con receptor de estrógeno, en la línea celular MCF7, para lo cual utilizamos las técnicas de cultivo celular, inmunoprecipitación, Pull down y Western blot. Se determinó la expresión basal de WT1, Bcl2, Par4, RE y p53 en la línea MCF7 cultivada en condiciones estándar y en depleción de estrógeno, lo niveles de WT1 y Bcl-2 se redujeron en ausencia del estímulo estrogénico, mientras que los de Par4 aumentaron. Se demostró la existencia del complejo WT1-Par4 y éste fue capaz de unirse al promotor P1 de Bcl-2, esto de manera independiente a la presencia de estrógeno, de manera complementaria se demostró la existencia del complejo WT1-p53, el cual también es capaz de interactuar con P1. La inhibición de la expresión de Par4 causo un incremento
en la expresión de WT1, sin embargo no hubo cambios en la expresión de Bcl-2, en base a lo anterior se concluyó que los complejos WT1-Par4 y WT1-p53 son capaces de interactuar con P1 de manera independiente del estímulo estrogénico, y que la inhibición de Par4 no es suficiente para observar cambios en la expresión de Bcl-2.
Abstract
The estrogen receptor ER, Bcl-2 and WT1 are proteins that are involved in the breast cancer development. Par4 is a pro-apoptotic protein whose interactions with WT1 have been demonstrated being and important factor in the regulation of WT1 target genes. In this work we propose to determinate the existence of a WT1-Par4 complex, its ability to bind the Bcl-2 promoter, and a possible relation with RE in the MCF7 cell line model, to aim it we used the cell culture, immunoprecipitation, Pull down and Western blot techniques. The basal expression of WT1, Bcl-2, Par4, ER, and p53 in MCF7 cells cultured in standard conditions and estrogen depletion were determined, the expression of WT1 and Bcl-2 were reduced in the cells cultured without estrogen whereas the expression of Par4 was increased. We demonstrated that there is a WT1-Par4 complex and that is able to bind the P1 promoter in an estrogen independent manner, we also demonstrated the existence of the WT1-p53 complex that is also able to interact with P1. The inhibition of Par4 resulted in a reduction of WT1 expression however the Bcl-2
expression was not affected. We conclude that the WT1-Par4 and WT1-p53 complexes are able to bind P1 in an estrogen independent manner, and that the Par4 inhibition is not
enough to down regulate the Bcl-2 expression. |
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