Efecto del silenciamiento de E6 y E7 (HPV 16) sobre la expresión de MDM2 en una línea celular de cáncer cervical - Díaz García, Daniel (2009)
El cáncer cérvico-uterino da muerte a una gran cantidad de mujeres a nivel mundial sin mencionar que en México ocupa el primer lugar de muerte por cáncer. La aparición del cáncer cervical ha sido asociada, en 99% de los casos, con la infección previa del virus de papiloma humano (HPV) en especial los serotipos 16 y 18. La actividad carcinógena del HPV se debe, principalmente, a la integración de DNA viral en el genoma de la célula hospedera y la expresión constitutiva de los genes E6 y E7, cuyos productos peptídicos interfieren con las proteínas endógenas P53 y Rb que son vitales en la vía de supresión de tumores. Se ha demostrado que la expresión continua de las onco-proteínas E6 y E7 es necesaria para la conservación del estado maligno de las células transformadas y que la represión de alguna de ellas puede inducir arresto en el crecimiento o apoptosis en las células carcinógenas. Se ha encontrado, además, que la vía de Mdm2, que es el represor natural de p53, se encuentra aparentemente funcional pero al mismo tiempo sustituida por E6. Es posible que al reprimir la expresión de E6, la vía de Mdm2 vuelva a estar funcional, más no ha sido reportado hasta el momento. Se ha logrado reprimir de manera eficiente y por diversos métodos la expresión de la proteína E6 más nunca se ha comprobado que efecto pudiera tener esta supresión sobre la expresión del gen mdm2. Se han desarrollado diferentes estrategias para la supresión de genes, entre las cuales se encuentra integrada, de manera relativamente reciente, el uso del RNA de interferencia (RNAi). El efecto del RNAi consiste en el silenciamiento de genes mediante la degradación específica del RNA mensajero correspondiente a la proteína que se desea suprimir, tal efecto de silenciamiento puede alcanzar hasta un 85% de efectividad y es conocido como knock-down. Tal eficiencia y especificidad de la vía de silenciamiento post-transcripcional lo vuelve una estrategia importante en la búsqueda de los efectos que pudieran presentarse en la expresión de un gen al silenciar otro que pudiera estar relacionado. En este trabajo se silenciaron los mRNA de E6 y E7 (HPV-16) por medio de RNAi y se analizó, por medio de PCR semicuantitativo, el efecto que el silenciamiento de alguno de estos oncogenes tiene sobre la expresión de mdm2 encontrando que la modificación en la expresión de E6 y E7 no tiene efecto alguno sobre mdm2, sin embargo, al inhibir la expresión de mdm2 el patrón de expresión de E6 y E7 se ve modificado en forma negativa mientras que la expresión de p53 se ve alterada en forma positiva.