Recursos alternativos para la identificación de Aspergillus spp. y la determinación de su potencialidad en la producción de aflatoxinas - Lozano Muñiz, Susana (2005)
Los mohos del género Aspergillus causan el deterioro de muchos productos alimenticios, debido a su crecimiento y/o a los productos metabólicos de la invasión fúngica, los cuales suelen ser muy tóxicos tanto para el hombre como para otros animales. Es por esto que la detección e identificación tanto de los hongos como de las toxinas son muy importantes para poder proponer medidas para su control y/o eliminación. Tradicionalmente la identificación de estos hongos se hace en base a las características macro y micromorfológicas, pero actualmente se han desarrollado métodos inmunológicos rápidos para su identificación y técnicas moleculares en base al polimorfismo del DNA nuclear, ribosomal o mitocondrial, para estudios a nivel intra- e inter-específico. El objetivo de este trabajo fue el de poder identificar a A. flavus de otros Aspergillus spp de importancia médica y económica a partir de cultivos microbiológicos, amplificando mediante PCR, las secuencias íntergénicas de los Aspergillus spp y mediante digestión enzimática ver los patrones electroforéticos en un análisis de PAGE, así como subclonar intermediarios de la ruta biosintética de aflatoxinas en E. coli como sistema de expresión de proteínas recombinantes, con objeto de que en investigaciones futuras se puedan generar anticuerpos policlonales y con esto, una técnica de detección de intermediarios de la ruta biosintética de aflatoxinas tipo ELISA. Se utilizaron 9 especies de Aspergillus (A. orizae, A. tamarii, A. pseudotamarii, A. sojae, A. niger, A. flavus, A. ochraceus, A. terreus, Eurotium chevalieri) cuya digestión de productos amplificados del rDNA por PCR-ITS fueron analizadas mediante PAGE y fue posible detectar un patrón electroforético característico con el que se puede identificar 6 de ellas (A. flavus, A. terreus, Eurotium chevaliery, A. ochraceus, A. orizae y A. niger), y otras 3 especies de Aspergillus (A. sojae, A. pseudotamarii y A. tamarii), obtuvieron el mismo patrón electroforético con el que se puede diferenciar de las otras 6 pero no entre ellas. Además, se sub-clonaron o los genes intermediarios de la ruta omt-A y ord-A de la biosíntesis de aflatoxinas, para que en futuras investigaciones sea posible el desarrollo de un método diagnóstico tipo ELISA y de esta manera evitar el uso de estándares de aflatoxinas en los métodos convencionales y de una manera indirecta inferir que está activa esta ruta de biosíntesis.