Evaluación de la respuesta inmunológica en monocitos diferenciados tratados con nanopartículas de quitosano comercial y purificado. - Rivera González, Teodoro Iván (2020)
El quitosano es un polímero biodegradable proveniente del exoesqueleto de los crustáceos, el cual es biocompatible y no toxico, presenta actividad inmunogénica y se ha utilizar en la síntesis de nanopartículas con actividad biológica, la cual puede depender del grado de purificación del quitosano. En este trabajo se sintetizaron y caracterizaron nanopartículas de quitosano (CtsNps) purificado y no purificado, obtenidas a partir de dos casas comerciales (Sigma-Aldrich® y Canada Bioscience) con el fin de evaluar si estas diferentes nanopartículas pueden generar la misma actividad inmunológica en monocitos aislados de sangre periférica mediante el análisis de perfil de citocinas, actividad fagocítica y marcadores de diferenciación. Las muestras de quitosano fueron purificadas mediante hidrolisis química y posteriormente se analizaron mediante FT-IR observándose la generación de nuevos grupos OH y la detección de grupos NH2 a una menor longitud de onda en comparación con las muestras no purificadas. Las nanopartículas de quitosano presentaron un tamaño menor a 200 nm con forma esférica y una carga superficial menor a +34 mV. Los monocitos fueron aislados a partir de sangre periférica obtenida de pacientes aparentemente sanos, estas células fueron cultivadas en placas de 6 pozos y posteriormente fueron tratadas con dos concentraciones diferentes de CtsNps (50 y 300 µg) por un tiempo de 72 horas. El medio de cultivo fue recuperado y almacenado a -40°C para el posterior análisis de citocinas. Los monocitos al ser tratados con diferentes CtsNps presentaron cambios morfológicos visibles al microscopio, los niveles de CD14 y CD86 se vieron disminuidos en comparación con los monocitos que no fueron tratados con CtsNps, a la vez estar partículas indujeron la alta producción de IL-8, baja producción de IL-10, IL-12p70 y TNF y la moderada producción de IL-1β e IL-6 dando un indicio de que estas nanopartículas son capaces de activar una respuesta inmunológica primaria en las células. La capacidad fagocítica de los monocitos diferenciados se vio disminuido en comparación con los monocitos no tratados. Finalmente, para determinar el fenotipo celular obtenido una vez que los monocitos se diferenciaban se realizó una inmunofluorescencia para determinar arginasa e iNOS las cuales son enzimas presentes en macrófagos antiinflamatorios y proinflamatorios respectivamente, mediante este ensayo se determinó que la mayoría de los monocitos diferenciados pertenecían a un fenotipo proinflamatorio, debido a que se detectó una alta fluorescencia perteneciente a la enzima iNOS. Con este trabajo de investigación damos a conocer que las nanopartículas de quitosano obtenidas a partir de quitosano purificado presentan una mayor actividad inmunológica en comparación con el quitosano comercial; por lo cual su uso como agente encapsulante, terapéutico o de diferenciación dependerá del tipo de partícula que se utilice.