Producción de hormona del crecimiento bovino por Pichia Pastoris - Gallardo Blanco, Hugo Leonid; Sánchez Domínguez, Celia Nohemí; Padilla Rivas, Gerardo Raymundo; Barrera Saldaña, Hugo Alberto (2003)
La administración de BGHr al ganado bovino incrementa la tasa de crecimiento, la ganancia de peso y la producción de carne y leche. Como objetivo nos propusimos construir clonas de P. pastoris que portaran el ADNc de la BGH, y después valoramos su capacidad para producir ésta y secretarla al medio cultivo. Para esto se efectuó el diseño, síntesis y ensayo de oligonucleótidos que nos permitieron tanto amplificar por la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) el ADNc de BGH como modificarlo para facilitar su inserción en un vector de integración (pPIC9) para P. pastoris (con el uso de la Pfu ADN polimerasa, con capacidad correctora). Se obtuvieron clonas de E. coli conteniendo el vector construido (pPIC9bGHPfu) y que se caracterizaron enzimáticamente de forma exhaustiva. Se transformaron las levaduras con la técnica de esferoplastos, y después se caracterizaron las clonas obtenidas (con medios selectivos y con la PCR). Se observó que la producción de BGHr en las condiciones de fermentación ajustadas previamente para producir HGH22kDa en pequeña escala fue muy baja. Se experimentó con varias condiciones de fermentación y de diálisis, con lo que logramos incrementar la producción de BGHr; concluyendo que el ph, el porcentaje de metanol y la composición del medio de cultivo, así como el tiempo de fermentación son variables que afectan la producción de BGHr y su susceptibilidad a la proteólisis enzimática y/o fotoquímica.